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人活性氧 (ROS) 酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

更新時(shí)間:2023-09-11    點(diǎn)擊次數(shù):2167

活性氧 (ROS) 酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書


  本試劑盒僅供研究使用。


檢測范圍:0.3ng/mL - 8ng/mL


  規(guī)格:96T  48T 

  貨號:BS-9689-A   BS-9689-B


使用目的:

本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中活性氧 (ROS) 含量。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人活性氧(ROS)水平。用純化的人活性氧(ROS) 抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入活性氧 (ROS),再與 HRP  標(biāo)記的活性氧 (ROS) 抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏 色的深淺和樣品中的活性氧 (ROS) 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度 (OD  ),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人活性氧 (ROS) 濃度。

試劑盒組成:

1

30 倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

標(biāo)試劑

6ml×1

8

標(biāo)準(zhǔn)品 (16ng/mL)

0.5ml×1

3

標(biāo)包被板

12 孔×8

9

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑 A

6ml×1

11

封板膜

2

6

顯色劑 B

6ml×1/

12

密封袋

1 個(gè)

標(biāo)本要求:

1 .標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不 馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的 (HRP) 活性。

操作步驟:

1.     標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀 。

8ng/mL

5 號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

4ng/mL

4 號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2ng/mL

3 號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1ng/mL

2 號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

0.5ng/mL

1 號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.     加樣:分別設(shè)空白孔 (空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)、 待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,


然后再加待測樣品 10μl  (樣品最終稀釋度為 5 ) 。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3.     溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.     配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。

6.     加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl ,空白孔除外。

7.     溫育:操作同 3。

8.     洗滌:操作同 5

9.     顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl ,再加入顯色劑 B50μl ,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

10 分鐘.

10.   終止:每孔加終止液 50μl ,終止反應(yīng) (此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.   測定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度 (OD ) 。  測定應(yīng)在終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié)

操作程序總結(jié):.png


計(jì)算:

標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)

1 .試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未 用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

     2 .濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3 .各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好 控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4  請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高 (樣本 OD 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD ),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù) (n ) 后再測定,計(jì) 算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(shù) ( ×n×5)。

    5  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染

    6 .底物請避光保存。

   7 .嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

   8 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

    9 .本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1 .試劑盒保存:;2-8℃。

2 .有效期:6 個(gè)月

   人活性氧 (ROS) 酶聯(lián)免疫分析試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。


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