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本生闡述實驗原理:ELISA雙抗體夾心法

更新時間:2023-06-01    點擊次數(shù):1392

  本生闡述實驗原理:ELISA雙抗體夾心法


  簡介

  ELISA 的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。

  ELISA 材料與儀器:

  (1) 包被緩沖液 (pH 9.6 0.05 M 碳酸鹽緩沖液)

  (2)洗滌緩沖液 (pH 7.4,0.15 M PBS)

  (3)稀釋液

  (4)終止液(2 M H2SO4)

  (5)底物緩沖液 (pH 5.0)

  (6)四甲基聯(lián)苯胺(TMB)使用液

  (7)2,2’-連氮基-雙-3-乙基-苯丙噻唑啉磺胺(ABTS)使用液

  (8)抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體:按說明書處理。

  (9)標(biāo)準(zhǔn)品:用稀釋液稀釋成梯度濃度溶液。

  (10)96 孔聚苯乙烯塑料板 (酶標(biāo)板)。


試劑盒1.jpg


  ELISA實驗步驟:

  用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。

  加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,通過反應(yīng)也結(jié)合在固相載體上。

  加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

  酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達(dá)到很高的敏感度。

  某些分泌型蛋白,用siRNA 干擾后可以用ELISA 進(jìn)行檢測。

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