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大家來了解下,細胞凍存的注意事項!

更新時間:2022-07-19    點擊次數(shù):3963

  大家來了解下,細胞凍存的注意事項!

 

  細胞凍存是利用細胞凍存管,將細胞放在低溫環(huán)境,減少細胞代謝,以便長期儲存的一種技術。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,起到了細胞保種的作用。不妨來看看BUNSEN本生小編的詳解:

  細胞凍存與復蘇:

  一般來說,細胞進行轉(zhuǎn)移,最佳的策略是進行低溫保存,而細胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時,細胞內(nèi)的酶活性均已停止,即代謝處于*停止狀態(tài),故而可以長期保存

  1、從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存,但為對數(shù)生長期細胞。在凍存前天盡量換培養(yǎng)液;

  2、將凍存管放入液氮容器或從中取出時,要做好防護工作,以免凍傷;

  3、凍存和復蘇盡量用新配制的培養(yǎng)液。

  細胞凍存:

  目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由冰晶形成的細胞損傷。

  1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌種保存很少用于細胞凍存。

  2、取對數(shù)生長期的細胞,用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來,懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中。

  3、離心1000 rpm,5 min.

  4、去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,計數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細胞的最終密度為5x10^6/ml~1x10^7/ml.

  5、 在凍存管上標明細胞的名稱,凍存時間及操作者。

  6、 凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min;當溫度達到-25℃以下時,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時,則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。

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